內(nèi)毒素作為生物藥安全檢項(xiàng)，是法規(guī)要求的必檢項(xiàng)，所有藥物生產(chǎn)對(duì)于內(nèi)毒素的控制都非常嚴(yán)格（＜5EU/kg體重），內(nèi)毒素的去除成為生物藥工藝控制的一個(gè)重要環(huán)節(jié)。內(nèi)毒素去除目前面臨的困境是比較耗時(shí)，同時(shí)去除過程也會(huì)導(dǎo)致產(chǎn)品的損失以及毒性物質(zhì)的引入。所以內(nèi)毒素的去除一直困擾很多企業(yè)，特別是在大腸桿菌大規(guī)模生產(chǎn)階段。

內(nèi)毒素的去除方法主要有超速離心，離子交換和親和層析的方法，在大規(guī)模生產(chǎn)工藝中內(nèi)毒素的去除主要采用后兩種方式，離子交換原理是結(jié)合帶負(fù)電荷的內(nèi)毒素，對(duì)于質(zhì)粒DNA或者酸性蛋白質(zhì)的內(nèi)毒素去除效果會(huì)不夠理想，所以目前工業(yè)界傾向于親和層析的方法去除內(nèi)毒素。親和層析的好處在于能夠特異性結(jié)合內(nèi)毒素，終產(chǎn)品的損失少（相對(duì)于離子交換），應(yīng)用范圍較廣，包括質(zhì)粒DNA和蛋白質(zhì)，同時(shí)，也不會(huì)有毒性物質(zhì)的引入。

本文將推薦一款來自英國Astrea Bioseparations的Etoxiclear?層析介質(zhì)，它是一種高性能、非離子交換、合成的親和層析吸附劑，可經(jīng)濟(jì)高效地去除內(nèi)毒素，支持GMP生產(chǎn)，有凝膠和一次性預(yù)裝柱兩種形式產(chǎn)品，滿足不同的工藝需求。

什么是EtoxiClear?親和層析？

親和層析是一種特殊的蛋白質(zhì)純化方法，其利用生物分子之間的特異相互作用進(jìn)行分離。EtoxiClear?親和層析針對(duì)內(nèi)毒素具有高選擇性和高分辨率，可以更好的去除內(nèi)毒素。親和層析的優(yōu)點(diǎn)在于其高度特異性和高純度，適用于對(duì)純度要求很高的生物制品的生產(chǎn)。雖然過離子柱可以在一定程度上控制內(nèi)毒素水平，但是個(gè)別項(xiàng)目仍然會(huì)有超標(biāo)的可能。EtoxiClear?是市場上非常獨(dú)特的一款去除內(nèi)毒素的產(chǎn)品，相比于離子層析方法，EtoxiClear?優(yōu)勢包括：

• 高特異性：專為去除內(nèi)毒素而設(shè)計(jì)，可特異性去除內(nèi)毒素
• 高載量：高內(nèi)毒素動(dòng)態(tài)結(jié)合載量（> 1,000,000 EU/ml）；
• 經(jīng)濟(jì)高效，支持放大；
• pH兼容范圍廣：pH 4.0 - pH 8.0，
• 滿足GMP物料要求，法規(guī)注冊資料完善
• 低蛋白結(jié)合率：通常目的蛋白回收率>90%；
• 高度穩(wěn)定、人工合成、無毒的親和配基；
• 有預(yù)裝柱和填料兩種產(chǎn)品形式，可滿足不同需求。
• 填料耐堿性強(qiáng)：0.5M-1M NaOH CIP

EtoxiClear?內(nèi)毒素親和填料性能數(shù)據(jù)

可擴(kuò)展性

EtoxiClear?已被證明能夠在實(shí)驗(yàn)室規(guī)模(5mL柱)和工業(yè)規(guī)模(785mL)下有效去除純化的免疫球蛋白溶液中的內(nèi)毒素。

上樣：含有相似起始內(nèi)毒素濃度的IgG蛋白溶液(~5 mg/mL)

處理能力強(qiáng)

EtoxiClear?可提供填料和預(yù)裝柱兩種形式產(chǎn)品，以滿足不同的實(shí)驗(yàn)需求。下表可用于估算處理不同規(guī)模樣品所需的柱尺寸。

規(guī)格：EvolveD?柱，5 min保留時(shí)間

針對(duì)常用緩沖液的內(nèi)毒素清除數(shù)據(jù)

EtoxiClear?可用于各種緩沖液的內(nèi)毒素去除。下表顯示了細(xì)胞培養(yǎng)應(yīng)用中常用的各種緩沖液的內(nèi)毒素清除效率，即使較低的起始內(nèi)毒素濃度(~20EU/mL)也可以有較高的內(nèi)毒素清除率。

* 等于或低于檢測限值

高內(nèi)毒素清除率

EtoxiClear?具有很高的內(nèi)毒素清除率，可從多種蛋白樣品中進(jìn)行出色的蛋白質(zhì)回收，如下表所示的人血清白蛋白（HSA）和免疫球蛋白（IgG）溶液(均為~9 mg/mL)。

HSA樣品內(nèi)毒素清除率99.7%

IgG樣品內(nèi)毒素清除率98.9%

低蛋白結(jié)合率

與離子交換吸附劑不同，EtoxiClear?顯示出極低的蛋白質(zhì)結(jié)合性，不受蛋白質(zhì)等電點(diǎn)范圍限制，蛋白質(zhì)回收率高(通常高于90%)，如下所示：

EtoxiClear?技術(shù)參數(shù)

產(chǎn)品訂購信息

Astrea Bioseparations于1987年孵化自劍橋大學(xué)，擁有超過30年層析介質(zhì)研發(fā)和生產(chǎn)經(jīng)驗(yàn)，是世界級(jí)層析介質(zhì)產(chǎn)品與服務(wù)供應(yīng)商。目前使用Astrea的產(chǎn)品已有超過21個(gè)生產(chǎn)工藝通過了FDA和EMA的批準(zhǔn)。Astrea Bioseparations在全球擁有3個(gè)研發(fā)和生產(chǎn)基地，專注為生物大分子和CGT領(lǐng)域提供行業(yè)領(lǐng)先的層析介質(zhì)和技術(shù)服務(wù)。Astrea Bioseparations推出的基于納米纖維的新型層析技術(shù)，解決了傳統(tǒng)生物分離工具載量低和工藝耗時(shí)問題，實(shí)現(xiàn)更快、更環(huán)保、更具成本效益的純化過程，完全符合當(dāng)今生物治療創(chuàng)新的需求。

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